東南亞缺失型α-地中海貧血Zeta鏈蛋白
檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：東南亞缺失型α-地中海貧血Zeta鏈蛋白檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規格】
96人份/盒，48人份/盒。
【預期用途】
本試劑盒用于體外定性檢測人血液中Zeta鏈蛋白。
本試劑盒適用于0.5歲以上人群的東南亞缺失型α-地中海貧血的輔助診斷。
地中海貧血（Thalassemia）是由于常染色體遺傳性缺陷，引起珠蛋白鏈合成障礙，一種或幾種珠蛋白數量不足或完全缺乏，正常血紅蛋白不能形成，使紅細胞易被破壞，壽命縮短的溶血性貧血。地中海貧血基因型和表現型均多樣化，差異很大，根據缺失發(fā)生的基因不同，分為α與β地中海貧血。
α地中海貧血中的東南亞缺失型(--SEA)地中海貧血基因攜帶者在東南亞及我國南方分布最為廣泛，是造成潛在危害的主要類(lèi)型。因為雖然(--SEA)地貧基因攜帶者大部分無(wú)明顯癥狀，但雙方同為攜帶者的婚配子代就會(huì )有出現Bart’s水腫胎和Hb H病的可能性，給家庭和社會(huì )帶來(lái)沉重負擔。
已知血紅蛋白Zeta鏈存在于正常人的胎兒期，出生后3個(gè)月即不能檢出，但東南亞缺失型α-地中海貧血基因攜帶者的血液中終生存在Zeta鏈。因此，Zeta鏈可作為輔助診斷東南亞缺失型α-地中海貧血的標志蛋白。
【檢驗原理】
雙抗體夾心ELISA原理：用純化的抗Zeta鏈單克隆抗體包被微孔板，加入裂解的待檢血液，樣品中存在的Zeta鏈可與包被抗體形成抗原抗體復合物，再加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的抗Zeta鏈不同表位的單克隆抗體，形成抗體－抗原－二抗酶標記物免疫復合物。洗板，除去多余的結合物，加入顯色液，產(chǎn)生有顏色產(chǎn)物，用酶標儀測定顯色反應，根據顯色反應的強度進(jìn)行結果的定性判斷。
【主要組成成分】
1. 本試劑盒包含的組份
 組份名稱(chēng) 主要成分 使用方法 裝量
    96人份／盒 48人份／盒
1 單抗Zeta鏈包被板 微孔板中預包被抗Zeta鏈單克隆抗體（來(lái)源于小鼠） 可拆成單孔，直接使用 96孔 48孔
2 單抗Zeta鏈酶標記物 辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的抗Zeta鏈單克隆抗體（來(lái)源于小鼠）；硼酸鹽緩沖液，含0.1% Proclin-300、0.002%苯酚紅、蛋白穩定劑。 直接使用 6mL×2瓶 6mL×1瓶
3 Zeta鏈蛋白陽(yáng)性對照 α-地中海貧血基因攜帶者血液，含40%甘油與0.02%硫柳汞。 取25l加入至200μL樣品裂解液中，劇烈振蕩60秒使紅細胞完全裂解。 0.5mL×1支 0.5mL×1支
4 Zeta鏈蛋白陰性對照 正常人血液，含40%甘油與0.02%硫柳汞。 取25l加入至200μL樣品裂解液中，劇烈振蕩60秒使紅細胞完全裂解。 0.5mL×1支 0.5mL×1支
5 Zeta鏈蛋白臨界對照 重組Zeta鏈蛋白，40ng/mL；硼酸鹽緩沖液，含40%甘油、0.2%硫柳汞、蛋白穩定劑。 直接使用 1.5mL×1支 1.5mL×1支
6 顯色液A 含檸檬酸、過(guò)氧化氫 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 顯色液B 含檸檬酸、四甲基聯(lián)苯胺（TMB） 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
8 濃縮洗滌液（10倍） 磷酸鹽緩沖液，含Tween-20，10倍濃縮 用蒸餾水或去離子水10倍稀釋后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
9 樣品裂解液 含0.83%氯化銨 直接使用 30mL×1瓶 30mL×1瓶
10 終止液 0.5 mol/L H2SO4溶液 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
11 密封袋  用于密封板條 1個(gè) 1個(gè)
12 封板膜  用于密封板條 4片 4片
13 記錄紙  用于試驗記錄 1份 1份
注：只有全部使用本公司試劑才能保證檢測效果，不能混用其它制造商的產(chǎn)品；不同批號的組份不得混用。
2. 需要但未提供的材料：
蒸餾水或去離子水
微孔板清洗器
10μL～100μL、1mL移液器與一次性吸嘴
37℃恒溫設備
微孔振蕩器
60分鐘或更長(cháng)時(shí)程的計時(shí)器
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。生產(chǎn)日期及失效日期見(jiàn)標簽。
拆封后未用完的微孔板應放入密封袋內2℃～8℃保存。液體組份應擰緊瓶蓋2℃～8℃保存。各組份拆封后應在一個(gè)月內用完。
【適用儀器】
具有450nm波長(cháng)的酶標儀
【樣本要求】
采用無(wú)菌抗凝靜脈血。全血樣本若不能立即檢測，可4℃存放一周，或-20℃存放一個(gè)月，或-70℃存放3年。本試驗可用于含EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉、草酸鈉、雙草酸鹽抗凝劑樣本的檢測，但含其它種類(lèi)抗凝劑的樣本能否用于本試驗尚無(wú)實(shí)驗數據。染菌標本請勿使用；溶血狀態(tài)對實(shí)驗結果無(wú)影響；對嚴重貧血患者的樣本應先將樣本中血漿與紅細胞比例調整至1:1后，再按要求進(jìn)行稀釋。
【檢驗方法】
1.  試驗過(guò)程注意事項
1.1  試劑盒各組份從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應在室溫（20℃～25℃）平衡至無(wú)潮氣方可使用。拆封后未用完的微孔條應放入密封袋內保存。
1.2  在儲存及溫育過(guò)程中，應避免強光直接照射。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染。
1.3  為避免試劑或樣品的微生物污染及交叉污染，應使用一次性吸嘴，不要重復使用。
1.4  在取用對照品和酶標記物之前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻，加樣前，使用微孔振蕩器充分混勻稀釋過(guò)的樣品。
1.5  嚴格遵守規定的溫育時(shí)間和溫度。如果第一孔與最后一孔加樣時(shí)間間隔太長(cháng)，將會(huì )導致不同的“預溫育”時(shí)間，從而影響測量值的準確性及重復性。
1.6  洗滌結束時(shí)，應將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，確保所有孔內均無(wú)殘留洗滌液，避免產(chǎn)生泡沫。如果使用自動(dòng)洗板機，應注意正確操作。
2.  試驗準備
2.1  試劑盒反應試劑準備
2.1.1  微孔條
將檢測所需數量的微孔條固定于板架上，剩余的微孔條放入密封袋中保存。
2.1.2  洗滌液
在干凈的量筒內稀釋濃縮洗滌液。50mL濃縮洗滌液加入蒸餾水或去離子水至500mL，混勻。
2.1.3  其它液體組份
直接使用，使用前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻。
2.2  樣品準備
取充分混勻的待檢全血樣品、陽(yáng)性對照、陰性對照各25l分別加入至200μL樣品裂解液中，在旋渦振蕩器上劇烈振蕩60秒使紅細胞完全裂解。
3.  檢測過(guò)程
3.1  每次實(shí)驗每板須設空白孔（若以雙波長(cháng)檢測不設空白孔）、陽(yáng)性對照、陰性對照各1孔，臨界對照3孔?？瞻卓撞患訕悠泛兔笜擞浳?，只加洗液、顯色液A、顯色液B和終止液；臨界對照直接使用，100l/孔。其余每孔加入裂解后樣品100l。加封板膜置37℃±1℃溫育60分鐘。
3.2  甩凈孔中液體，將洗液注滿(mǎn)每孔（約300μL/孔）后，每次停留60秒后甩凈拍干，反復3次。除空白孔外每孔加酶標記物100l（2滴），加封板膜置37℃±1℃溫育60分鐘。
3.3  甩凈孔中液體，同上洗板3次，拍干后各孔加顯色液A、顯色液B各50μL，置37℃避光15分鐘，每孔加入終止液50μL，輕微震蕩微孔板以混合均勻。
3.4  單波長(cháng)檢測：以空白孔調零，用酶標儀讀取450nm處的A值；
雙波長(cháng)檢測：用酶標儀讀取450nm和630nm處的A值，以A450nm－A630nm計算A值。
4.  參考范圍
陰性對照A值≤0.15；0.20≤臨界對照A值平均值≤0.80，臨界對照A值平均值／陰性對照A值平均值≥2.0，陽(yáng)性對照A值＞臨界對照A值平均值，證明實(shí)驗成立。否則試驗結果無(wú)效，需重新試驗。
5.  結果判定
計算S/CO值，S/CO=樣品A值／臨界對照A值平均值。
反應性（R）：S/CO≥1.15
可疑（S）：0.85＜S/CO＜1.15
陰性（N）：S/CO≤0.85
【檢驗結果的解釋】
結果為反應性提示為東南亞缺失型α-地中海貧血基因攜帶者。對可疑結果樣品應復試，如復試結果仍然為可疑，則應做基因診斷確認。
【檢驗方法的局限性】
1.  樣品或試劑被微生物污染以及試劑的交叉污染可能導致錯誤結果。
2.  本試劑盒不適用于0.5歲以下人群東南亞缺失型α-地中海貧血篩查，不適用于Zeta鏈蛋白定量檢測。
3.  本品應由專(zhuān)業(yè)人員使用，結果僅供臨床參考，臨床醫生應結合病史全面考慮和診斷。
【產(chǎn)品性能指標】
1.  靈敏度、特異性
通過(guò)1034例臨床研究，與基因診斷方法比較，靈敏度為100％，特異性為100％。
2.  精密性
批內變異系數CV（%）不高于15%（n＝10）。
3.  交叉反應
未發(fā)現本品與beta地貧基因攜帶者的血有交叉反應。與其他類(lèi)型地貧基因攜帶者的交叉反應尚無(wú)實(shí)驗數據。
4.  干擾試驗
4.1  與樣品接觸的抗凝劑（EDTA、檸檬酸鈉、肝素鈉、草酸鈉、雙草酸鹽）對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾。
4.2  一定濃度范圍的內源性物質(zhì)（膽紅素0.1~0.4 mg/mL、血紅蛋白5~50 mg/mL、甘油三酯2~8 mg/mL）對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾。
【注意事項】
1.  本品僅用于體外診斷，一次性使用。
2.  用于制備本品陰性對照、陽(yáng)性對照的血液已經(jīng)HBsAg、HCV抗體、梅毒螺旋體抗體和HIV抗體檢測為陰性，試劑盒內其它各種組份均無(wú)生物傳染性。由于不能保證檢測各組份所有的傳染性因素，因此本品應作為具有潛在的傳染性材料對待，所有接觸試劑盒的人員應按實(shí)驗室規范要求進(jìn)行操作。
3.  任何臨床樣品都應作為具有傳染性樣品對待。
4.  待檢樣品及其他潛在感染材料試驗后應予以消毒。
5.  注意避免皮膚或黏膜直接接觸試劑或樣品。顯色液中含TMB，終止液含硫酸。含TMB的試劑在試驗中會(huì )誘發(fā)其它反應；含硫酸的試劑有腐蝕性。一旦接觸到這些液體，應立即用水徹底清洗。
【標識的解釋】
包裝標簽
的標識    
標識的含義 溫度限制 體外診斷醫療器械 參考使用說(shuō)明 不得二次使用
【參考文獻】
[1]Chui DH，Wong SC，Chung SW,Embryonic Zeta-globin chains in adults: a marker for alpha-thalassemia-1 haplotype due to a greater than 17.5-kb deletion. N Engl J Med. 1986 Jan 9;314(2):76-9
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Aug;85(3):293-9.
[3]Kutlar F，Moscoso H，Kiefer CR et al. Quantities of adult，fetal and embryonic globin chains in the blood of eighteen- to twenty-week-old human fetuses. J Chromatogr. 1991 Jul 5;567(2):359-68.
【基本信息】
注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱(chēng)：珠海經(jīng)濟特區海泰生物制藥有限公司
住所：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號     
聯(lián)系方式：        
售后服務(wù)單位名稱(chēng)：
聯(lián)系方式：
生產(chǎn)地址：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號    
生產(chǎn)許可證編號： 
【醫療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】
【說(shuō)明書(shū)核準日期及修改日期】