Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng)：Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
【包裝規格】
48人份／盒，96人份／盒。
【預期用途】
本試劑盒用于定性檢測人血清或血漿樣本中的Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體。
本試劑盒用于Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒感染的輔助診斷，不得用于無(wú)癥狀人群的產(chǎn)前篩查，不得將本試劑的檢測結果單獨作為終止妊娠的依據。
單純皰疹病毒(Herpessimplexvirus，HSV)屬于皰疹病毒科a病毒亞科，病毒顆粒大小約180納米。根據抗原性的差別目前把該病毒分為Ⅰ型和Ⅱ型。單純皰疹病毒在人群中廣泛存在，人是唯一的宿主。傳染方式很多，HSVⅠ型主要是通過(guò)皮膚、粘膜的直接接觸。HSVⅡ型則主要通過(guò)性行為。人群中HSVⅠ型感染較為普遍，主要引起生殖器以外的皮膚、粘膜和器官的感染。HSVⅡ型主要與外生殖器感染及新生兒感染有關(guān)，可引起生殖器皰疹、新生兒皰疹。如果孕婦患原發(fā)性皰疹病毒感染，病毒可能通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒而形成先天感染。如果孕婦產(chǎn)道中存在原發(fā)感染或復發(fā)的皰疹病毒，則可于分娩過(guò)程中感染新生兒而引起新生兒感染。
病毒感染1周后，血清中HSV IgM抗體即可測出，HSV IgG抗體在原發(fā)性感染后2~3個(gè)星期后產(chǎn)生，持續幾個(gè)月后開(kāi)始下降，復發(fā)性感染者的IgG抗體滴度通常無(wú)明顯升高。HSV IgG抗體的檢出可用于診斷有無(wú)HSV感染，并對易感人群采取適當的措施。
HSVⅠ型和HSV Ⅱ型病毒均可能對胎兒或新生兒造成危害，臨床上通常同時(shí)檢測HSVⅠ、Ⅱ型抗體，本試劑盒以HSVⅠ型和HSVⅡ型病毒抗原混合包被，檢測樣品中的Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體。
【檢驗原理】
酶聯(lián)免疫間接法原理：用Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒抗原包被微孔板，加待檢者血清或血漿到板孔中，樣品中存在的Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體特異性地與微孔板表面的Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒抗原結合，形成抗原抗體免疫復合物。洗板，除去多余物質(zhì)后，加入抗人IgM抗體酶標記物，形成（抗原－抗體－二抗酶標記物）免疫復合物。洗板，除去多余的結合物，加入顯色液，在酶作用下產(chǎn)生顏色反應，通過(guò)酶標儀測定顯色反應的強弱即可定性檢測待檢樣品中的Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體。樣品稀釋液中含有羊抗人IgG抗體，可與樣品中的人IgG抗體及類(lèi)風(fēng)濕因子結合，減少特異性IgG抗體及類(lèi)風(fēng)濕因子的干擾。
【主要組成成分】
1. 本試劑盒包含的組份
序號 組份名稱(chēng) 主要成分 使用方法 裝量
    96人份／盒 48人份／盒
1 預包被Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒抗原的微孔板 微孔板中預包被Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒天然抗原。 可拆成單孔，直接使用 96孔 48孔
2 抗人IgM抗體酶標記物 辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標記的抗人IgM單克隆抗體（來(lái)源于小鼠）；硼酸鹽緩沖液，含0.1% Proclin-300、0.002%苯酚紅、蛋白穩定劑。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
3 Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體陽(yáng)性對照 Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體陽(yáng)性人血漿或血清；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、蛋白穩定劑。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
4 Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體陰性對照 Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體陰性人血漿或血清；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、蛋白穩定劑。 直接使用 1.0mL×1支 1.0mL×1支
5 Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體臨界對照 Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒IgM抗體陽(yáng)性人血漿或血清；硼酸緩沖液，含0.02%硫柳汞、蛋白穩定劑。 直接使用 1.8mL×1支 1.8mL×1支
6 顯色液A 檸檬酸、過(guò)氧化氫。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
7 顯色液B 檸檬酸、四甲基聯(lián)苯胺（TMB）。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
8 濃縮洗滌液 磷酸鹽緩沖液，含0.5%Tween-20，10倍濃縮。 用蒸餾水或去離子水10倍稀釋后使用 50mL×1瓶 50mL×1瓶
9 樣品稀釋液（IgM） 硼酸鹽緩沖液，含甘油、山羊抗人IgG。 直接使用 50mL×2瓶 50mL×1瓶
10 終止液 0.5 mol/L H2SO4溶液。 直接使用 6.5mL×1瓶 3.5mL×1瓶
11 密封袋   1個(gè) 1個(gè)
12 封板膜   4片 4片
13 記錄紙   1份 1份
注：酶標記物、陽(yáng)性對照、陰性對照、臨界對照，必須使用試劑盒配備的，不能使用其它批號產(chǎn)品。顯色液A、顯色液B、終止液、濃縮洗滌液為通用試劑，可用于本公司所有ELISA試劑盒。
2. 需要但未提供的材料：
蒸餾水或去離子水
微孔板清洗器
（5～40）μL、（40～200）μL、200μL～1mL移液器與一次性吸嘴
37℃恒溫設備
微孔振蕩器
60分鐘或更長(cháng)時(shí)程的計時(shí)器
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。生產(chǎn)日期及失效日期見(jiàn)標簽。
拆封后未用完的微孔板應放入密封袋內2℃～8℃保存。液體組份應擰緊瓶蓋2℃～8℃保存。各組份拆封后應在一個(gè)月內用完。
【適用儀器】
具有450nm、630 nm波長(cháng)的酶標儀
【樣本要求】
應按照臨床采血技術(shù)規范操作采集血清或血漿樣品。室溫保存樣品不要超過(guò)8小時(shí)；若實(shí)驗在8小時(shí)以后進(jìn)行，需將樣品保存在2℃～8℃；如保存超過(guò)1周則保存在-20℃以下，-20℃以下凍存不超過(guò)8年，并盡量避免反復凍融，凍融次數不宜超過(guò)5次。本試驗可用于含EDTA、枸櫞酸鈉、肝素鈉抗凝劑樣本的檢測，但含其它種類(lèi)抗凝劑的樣本能否用于本試驗尚無(wú)實(shí)驗數據。盡管膽紅素（0.4mg/mL）、血紅蛋白（50mg/mL）、甘油三酯（8mg/mL）對本試劑盒檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾，仍應避免使用黃疸、溶血或高血脂樣品。明顯被污染的樣品不能用于檢測。
【檢驗方法】
1.  試驗過(guò)程注意事項
1.1  試劑盒各組份從冷藏環(huán)境中取出時(shí)，應在室溫（20℃～25℃）平衡至無(wú)潮氣方可使用。拆封后未用完的包被板應放入密封袋內保存。
1.2  在儲存及溫育過(guò)程中，應避免強光直接照射。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染。
1.3  為避免試劑或樣品的微生物污染及交叉污染，應使用一次性吸嘴，不要重復使用。
1.4  在取用對照品和酶標記物之前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻，加樣前，使用微孔振蕩器充分混勻稀釋過(guò)的樣品。
1.5  嚴格遵守規定的溫育時(shí)間和溫度。如果第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔太長(cháng)，將會(huì )導致不同的“預溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。
1.6  洗滌結束時(shí)，應將微孔板倒扣于紙巾上并輕輕敲打，以確保所有孔內均無(wú)洗滌緩沖液，避免產(chǎn)生泡沫。如果使用自動(dòng)洗板機，應注意正確操作。
2.  試驗準備
2.1  試劑盒反應試劑準備
2.1.1  微孔條
將檢測所需數量的微孔條固定于板架上，剩余的微孔條放入密封袋中保存。
2.1.2  洗滌液
在干凈的量筒內稀釋濃縮洗滌液。50mL濃縮洗滌液加入蒸餾水或去離子水至500mL，混勻。
2.1.3  其它液體組份
直接使用，使用前應輕輕搖動(dòng)使其充分混勻。
2.2  樣品準備
樣品1:100稀釋?zhuān)喝?0μL待檢樣品，加入至含有1mL樣品稀釋液（IgM）的小試管內，充分混勻。
3．  檢測過(guò)程
3.1  每次實(shí)驗每板須設空白孔（若以雙波長(cháng)檢測不設空白孔）、陽(yáng)性對照、陰性對照各1孔，臨界對照3孔?？瞻卓撞患訕悠泛兔笜擞浳?，只加洗液、顯色液A、顯色液B和終止液；陽(yáng)性對照、陰性對照、臨界對照直接使用，100μL/孔。其余每孔加入稀釋后樣品100μL。置37℃±1℃溫育30分鐘。
3.2  甩凈孔中液體，將洗液注滿(mǎn)每孔（約300μL/孔）后，甩凈拍干，反復3次。除空白孔外每孔加酶標記物50μL，置37℃±1℃溫育30分鐘。
3.3  甩凈孔中液體，同上洗板3次，拍干后各孔加顯色液A、顯色液B各50μL，置37℃±1℃避光15分鐘，每孔加入終止液50μL，輕微震蕩微孔板以混合均勻。
3.4  單波長(cháng)檢測：以空白孔調零，用酶標儀讀取450nm處的A值；
雙波長(cháng)檢測：用酶標儀讀取450nm和630nm處的A值，以A450nm－A630nm計算A值。
4.  參考范圍
陰性對照A值≤0.15，0.20≤臨界對照A值平均值≤0.80，臨界對照A值平均值/陰性對照A值平均值≥2.0，陽(yáng)性對照A值＞臨界對照A值平均值，證明實(shí)驗成立，否則試驗結果無(wú)效，需重新試驗。
5.  結果判定
計算S/CO值，S/CO=樣品A值／臨界對照A值平均值。
反應性（R）：S/CO≥1.15
可疑（S）：0.85＜S/CO＜1.15
陰性（N）：S/CO≤0.85
【檢驗結果的解釋】
1.  結果為反應性提示Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒新近感染，對于可疑（0.85＜S/CO＜1.15）結果建議患者1周內復查或利用其它方法學(xué)確認。
2.  感染初期，IgM未產(chǎn)生或滴度很低會(huì )導致陰性結果，疑似者應在7～14天內復查，復查時(shí)同時(shí)平行檢測上次采集的標本以確認是否出現血清學(xué)陽(yáng)轉或滴度明顯升高。
3.  HSV 感染的IgM抗體陽(yáng)性不僅發(fā)生在原發(fā)感染，在繼發(fā)感染亦可見(jiàn)IgM反應。
4.  免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，其血清抗體檢測的參考價(jià)值有限。
5.  假陽(yáng)性和假陰性結果可能對臨床造成不良影響，假陰性可能對胎兒或新生兒造成感染，假陽(yáng)性可能導致懷孕期婦女或新生兒接受不必要的抗病毒治療等。
6.  檢測結果僅供臨床參考，臨床醫生應結合病史、癥狀及其它檢測結果做出診斷。
【檢驗方法的局限性】
樣品或試劑被微生物污染以及試劑的交叉污染可能導致錯誤結果。
【產(chǎn)品性能指標】
1.  靈敏度、特異性
本品檢測1080例不同人群樣本，靈敏度為94.8%，特異度為93.1%。
2.  精密性
批內變異系數CV（%）不高于15%（n＝10）。
3.  交叉反應
與以下病原體的IgM抗體陽(yáng)性血清未發(fā)現交叉反應：弓形蟲(chóng)、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、巨細胞病毒、沙眼衣原體、梅毒螺旋體、人乳頭狀瘤病毒、白色念珠菌及細菌性陰道病。
4.  干擾試驗
與樣品接觸的常規抗凝劑（EDTA、枸櫞酸鈉、肝素鈉）對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾。
一定濃度范圍的內源性物質(zhì)（膽紅素0.1~0.4 mg/mL、血紅蛋白5~50 mg/mL、甘油三酯2~8 mg/mL）對本品檢測結果無(wú)顯著(zhù)干擾。
5.  批間差
用3個(gè)批號試劑盒檢測同一份重復性參考品，3個(gè)批號試劑盒之間的批間變異系數（CV）不高于30%（n=30）。
【注意事項】
1.  本品僅用于體外診斷，一次性使用。
2.  用于制備本品陰性對照、陽(yáng)性對照、臨界對照的血清或血漿已經(jīng)HBsAg、HCV抗體、梅毒螺旋體抗體和HIV抗體檢測為陰性，試劑盒內其它各種組份均無(wú)生物傳染性。由于不能保證檢測各組份所有的傳染性因素，因此本品應作為具有潛在的傳染性材料對待，所有接觸試劑盒的人員應按實(shí)驗室規范要求進(jìn)行操作。
3.  任何臨床樣品都應作為具有傳染性樣品對待。
4.  待檢樣品及其他潛在感染材料試驗后應予以消毒。
5.  注意避免皮膚或黏膜直接接觸試劑或樣品。顯色液中含TMB，終止液含硫酸。含TMB的試劑在試驗中會(huì )誘發(fā)其它反應；含硫酸的試劑有腐蝕性。一旦接觸到這些液體，應立即用水徹底清洗。
【標識的解釋】
包裝標簽
的標識    
標識的含義 溫度限制 體外診斷醫療器械 參考使用說(shuō)明 不得二次使用

【參考文獻】
[1] Levi M，Ruden U，Carlberg，H，et a1．The use of peptides from glycoproteins G-2 and G-1 for detecting herpes simplex virus type 2 and type-common antibodies[J]．J Clin Virol，1999，12(3)：243—252．
[2] Oladepo D，Klapper PE，Marsden HS．Peptide based enzyme linked immnoassays for detection of anti HSV2 IgG in human sera[J]．J Virol Methods。2000。87(1—2)j63—70．
[3] Van Doornum GJ，Slomka MJ，Buimer M，et a1．Comparison of a monoclonal antibody-blocking enzyme-linked immunoassay and a strip immunoblot assay for identifying type-specific herpes simples virus type 2 serological responses[J]．Clin Diagn Lab Immunol，2000，7(4)：641—644．
[4] Hashido M，Lee FK，Inouye S，et a1．Detection of herpes simplex virus type-specific antibodies by an enzyme—linked immunosorbent assay based on glycoprotein G[J]．J Med Virol，1997，53(4)：319－ 323．
[5] Prince HE，Ernst CE，Hogrefe WR．Evaluation of an enzyme immunoassay system for measuring herpes simplex virus (HSV) type 1-specific and type 2-specific IgG antibodies[J]．J Clin Lab Anal，2000，14(1)：13—16．
[6] Tunback P，Liljeqvist JA，Lowhagen GB．et a1．Glycoprotein G of herpes simplex virus type 1：identification of type—specific epitopes by human antibodies[J]．J Gen Virol，2000，81：1033—1040．
[7] Wittekindt C，Fleckenstein B，Wiesmuller K．et a1．Detection of human serum antibodies against type-specifically reactive peptides from the N-terminus of glycoprotein B of herpes simplex virus type 1 and type 2 by surface plasmon resonance[J]．J Virol Methods，2000．87(1—2)：133—144．
[8] Pramod NP，Gopalakrishnan V，Mohan R．et a1．Enhanced detection of herpes simplex virus from ocular specimens of herpetic keratitis patients[J]．Indian J Pathol Microbiol，1998．41(1)：49—53．

【基本信息】
注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱(chēng)：珠海經(jīng)濟特區海泰生物制藥有限公司
住所：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號     
聯(lián)系方式：        
售后服務(wù)單位名稱(chēng)：
聯(lián)系方式：
生產(chǎn)地址：珠海市唐家灣鎮港灣大道創(chuàng )新四路18號    
生產(chǎn)許可證編號： 
【醫療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】
【說(shuō)明書(shū)核準日期及修改日期】